TRIRNA裂解液ZS-M11008

TRI RNA 裂解液 ZS-M11008

Superbrilliant® TRI RNA 裂解液
Superbrilliant® TRI RNA Reagent

Cat. No.: ZS-M11008
组分:
储存:2-8避光保存,可保存 2 年。
简介Superbrilliant® TRI RNA 裂解液是一种可提取动植物样品中 RNA 的制品。实验操作快速方便,颜色鲜明,便于分层。样品在 TRI RNA Reagent 中能够充分被裂解,在样品匀浆或裂解过程中,它可保持 RNA 的完整性,同时裂解细胞,溶解细胞内含物,加入氯仿后,溶液分为无色水相和粉红色有机相,RNA 在水相,用异丙醇可沉淀回收 RNA,有机相用异丙醇可回收蛋白质。该试剂可用于小量样品(50-100 mg 组织、1x10 6细胞)也适用于大量样品(≥1g组织、>10 7细胞)。TRI RNA Reagent 具有很强的广谱性,可以适用于各种样品的总 RNA提取,对人、动物、植物组织、病毒、细菌、真菌等样本均适用,可同时处理大量不同样品,提取过程方便快速,整个提取过程在一小时内即可完成提取得率高、纯度高、完整性好的总RNA。分离的总 RNA 蛋白质和 DNA 污染极低,可用于 Northern Blot、反转录、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和基因克隆 cDNA 文库构建、荧光定量 PCR、高通量测序等各种分子生物学实验。
注意事项:该试剂含有强变性剂,请勿直接于皮肤接触或吞咽,若接触到皮肤或眼睛请尽快到医院处理。实验时务必穿实验服,戴手套。
操作方法
自备试剂:氯仿,异丙醇,70%乙醇(DEPC 水配置),RNase Free H2O
实验前准备:
RNA 制备的关键是要抑制细胞中的 RNA 分解酶和防止所用器具及试剂中的 RNA 分解酶的污染。因此,在实验中必须采取以下措施:戴一次性干净手套;使用 RNA 操作专用实验台;在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的 RNA 分解酶的污染。
注意事项:
1. 尽量使用一次性塑料器皿,若用玻璃器皿,应在使用前用 0.1% DEPC 水溶液在 37处理12h,然后在 120高压灭 30 min 以除去残留的 DEPC
2. 用于 RNA 实验的试剂,须使用干热灭菌(18060 min)或使用上述方法进行 DEPC 处理灭菌后的玻璃容器盛装(也可以使用 RNA 实验用的一次性塑料容器),使用的无菌水须用0.1%DEPC 处理后再进行高温高压灭菌。
3. RNA 实验用的试剂和无菌水都应专用,避免混用后交叉污染。
实验操作
建议:如果细胞太多裂解后变黏了吸不上来,可以剪一下枪头吸上来。贴壁细胞用细胞刮刀或 枪头用力多刮几次,或加 TRI RNA 裂解液前先收集一下细胞。

常见问题分析

1. 抽提率低。可能原因:(a. 样品裂解或匀浆处理不彻底;b. RNA  沉淀未完全溶解)

2. A260/A280<1.65 。可能原因:(a. 检测吸光度时,RNA 样品没有溶于水,而溶于了 TE   中;b .样品匀浆时加的组织量过多;c .分层后,吸取上清液不足 500μld .吸取水相时混 入了有机相)

3. DNA 污染过多。可能原因:(a.  样品匀浆时加的试剂量太少或组织量过多;b. 样品中含有有机溶剂)

解决方法:使用该试剂通常基因组 DNA 污染含量<0. 1ng/ μL ,如需要彻底去除 DNA 的污染, 请使用 Superbrilliant® DNase I( RNA 酶抑制剂)ZS-M11009)消化去除基因组 DNA 污染。

Fig 1.使用 Superbrilliant®  TRI RNA 裂解液提取乳腺癌 MDA-MB-231 细胞 RNA Thermo NanoDrop 20001.7< A260/A280 <2.2 A,琼脂糖凝胶电泳。B,CAgilent 2100 Bioanalyzer 检测图谱 RIN>=7.0 and 28S/18S>0.7

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