6 分钟新鲜血液 RNA 提取试剂盒 ZS-M11016

组分:

储存：Buffer LS 于 4℃保存，其他组分室温避光保存，试剂盒保质期 2 年。

简介：该提取试剂盒采用基于异硫氰酸胍/苯酚法的优化的独特的裂解液，RNA  与硅胶膜离心柱特异地结合，可快速高效从新鲜抗凝全血样本中纯化出高纯度的 总 RNA，快速有效去除细胞中基因组 DNA 和蛋白质，使获得的 RNA 纯度高， 稳定性好。总 RNA 包括大于 200 个核苷酸的 RNA(也常被称为总 RNA)和小于  200 个核苷酸的小 RNA(small RNA) 。本试剂盒具有高效、快速、方便的特点，总时长仅需 6 min 左右。是目前国际上操作步骤最少、用时最短的血液 RNA 提取试剂盒之一。所获得的 RNA 可直接用于反转录、基因克隆、定量检测、体外翻译、RNase protection assay,  也可用于基因表达芯片分析(microarray) 、文库构建、杂交等多种分子生物学实验。

注意事项：

(1)  本试剂盒中的 Washing Buffer  中已经加乙醇，无需单独添加。

(2) Solution R1 和 Solution R2 均具有腐蚀性，注意防护。

操作方法

（1）白细胞分离

1   取一支 15ml 离心管，加入与样本量相等的 Buffer LS（不足 3ml 加入 3ml Buffer LS）。用吸管小心吸取血液样本加于 Buffer LS 的液面上，400g，30-40min。

（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果，但最大离心力最好不超过 1200g）。

2   离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层（含血小板）。 第二层为环状乳白色淋巴细胞（单核/单个核细胞层）。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层（含大量中性粒细胞）。

3   取第二层白色淋巴细胞环层，加入三倍体积的生理盐水或 PBS 混匀，60-250g，离心 10min，弃去上清。

4   加 5-8ml 生理盐水或 PBS 混匀，60-250g 离心 10min，弃去上清。

5   重复上一步，用 30~100μl 水或 PBS 重悬细胞沉淀。

（2）裂解/上柱（1.5ml EP  管中处理）

加入 120μl Solution R1 漩涡混匀 30s ，加入 500μl Solution R2 上下颠倒混合均匀，倒入吸附柱中。13000rpm  离心 30s，倒掉废液，进行后续洗涤/洗脱步骤。

（3）洗涤和洗脱

向吸附柱中加入 500μl RNA Washing Buffer，13000rpm  离心 15s。重复此步骤一次。将吸附柱重新放回离心机，13000rpm  空离心 1min ，将残留的乙醇彻底甩干。 将吸附柱芯放入到 1.5 mL Nuclease Free  收集管中，向吸附柱芯中加入 20~50μl Nuclease Free H2O，室温放置 1min ，13,000rpm  离心 1min ，洗脱液即为提取的 RNA ，冷冻保存。

Fig 1.使用 SuperbrilliantTM 6 min Fresh Blood RNA Extraction Kit 提取新鲜全血RNA，白细胞分离示意图。