5x 高效 PCR MIX
货号 | 次数 |
NRR0008 | 1mL/管 |
适用范围
基因检测、定点突变分析和 T-A 克隆。
试剂盒组成、储存、稳定性
试剂盒组成 |
保存 |
规格 |
5XEffcient Taq PCR Master Mix (with Dye) |
-20℃ |
1mL/ 管 |
储存事项
长期储存置于 -20℃ 以下,可保存 3 年;短期使用置于 4℃(12 个月)保存。
产品介绍
本品是用于普通 PCR 扩增的 5x 预混体系,含有高纯度的 Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2 、 反应缓冲液、PCR 增强剂和稳定剂,使用时只需加入模板、引物和水,使其工作浓度为 1×, 即可进 行反应, 大大简化了操作过程、提高了效率、整个反应体系非常稳定、减少了 PCR 操作过程中的人为 误差、节约操作时间、降低污染几率, 具有快速简便、重复性高、特异性好、灵敏度高和稳定性好的特点。 Taq DNA Polymerase 其基因来源于 Thermusaquaticus polymerase, 具有扩增效率高、错配率 低的优良性能,由于 Taq DNA 聚合酶在变性步骤中(约 94℃)不失活,可直接进入第二轮循环,因 此不必每轮循环时重新加入新酶, 这使得 Taq DNA 聚合酶成为 PCR 反应中的独特用酶。该制品可应 用于常规 PCR 扩增和大规模基因检测。该制品中已经含有溴酚蓝染料,PCR 扩增完毕后可直接点样 于琼脂糖凝胶,无需再加入 DNA Loading Buffer。该制品以人基因组 DNA 为模板可很好的扩增 5kb 的 DNA 片段。由于 Taq 酶没有 3’至 5’的外切酶活性,因此在 DNA 聚合过程中相当于核苷酸转 移酶的作用,最终会导致 PCR 产物的 3’末端会产生 3’-dA overhangs, 即产生带一个 A 的 3’ 粘端。
操作步骤
1. 室温融解 5×Effcient Taq PCR Mix (with Dye)。
2. 按下表配制反应体系并混合均匀:
5×Effcient Taq PCR Master Mix |
10 μL |
上游引物 (10 μM) |
2μL |
下游引物 (10 μM) |
2μL |
模板 DNA |
1-500 ng |
ddH2O |
up to 50 μL |
* 模板 DNA 用量参数 (50 μl 反应体系 )
模板 DNA ( 目的片段≤ 5 kb) |
25-500 ng Genomic DNA |
2-20 ng Plasmid DNA |
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1-2 μL cDNA from RT reaction |
3. PCR 扩增循环参数
循环数 |
温度 |
时间 |
1st Cycle |
95℃ |
2min |
25-35 Cycles |
95℃ |
10s |
50~60℃ |
20s |
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72℃ |
2kb/1min |
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Last Cycle |
72℃ |
5min |
具体程序根据实际扩增情况而定。
4. 电泳:1% 琼脂糖凝胶电泳,上样 5 μL 进行电泳检测。
- mL