NSS0102 特级胎牛血清

胎牛血清

Fetal Bovine Serum

产品内容

储存：本试剂需要在-20℃~-18℃储存，冷链运输。有效期五年。

产品简介

胎牛血清，为浅黄色或浅红色澄清稍粘稠液体，冻融后可能存在少量絮状沉淀。

胎牛血清，严格采自 5~8 个月龄胎牛，富含细胞生长所需的各种生长因子、激素、氨基酸等物质。经大容量（1200L）混合、三道 100nm 终端过滤、C+A 级环境全自动化灌装、经积累沉淀 30 多年独创的分级技术质量评价。

使用说明

收到胎牛血清后，首先检查包装是否为原包装以及是否完整，然后储存于-20℃~-18℃冰箱。

使用前，按以下步骤解冻：从-20℃~-18℃冰箱取出；先在 2~8℃放置 12~24H 部分解冻；最后在室温完全解冻（不建议直接常温解冻，更易絮状沉淀）；解冻过程中随时摇晃均匀。

血清用量：原则上血清添加量不宜太多，通常分为 5%、10%、20%几档，部分细胞原代提取时会使用 20%血清，大部分细胞正常培养时会使用 10%的血清浓度。至于某一株细胞适应什么样的血清浓度，还需要根据细胞特性、实验目的做测试。

注意事项

1、-20℃~-18℃冰箱储存。如存放于 4℃，须一个月内用完。配制成完全培养基后，一周内

用完。

2、切忌在 37℃或者室温存放太久，容易导致血清中生长因子失活而影响细胞培养效果。

3、避免反复冻融，建议分装后保存。

4、尽量使用同批号产品，如换批号，建议先试用确认。

血清分级标准

该质量标准通过克隆形成实验和细胞增殖实验两种方法对胎牛血清进行综合评级，总分为100分。

克隆形成实验（占70分）：使用SP2/0细胞，在极低密度（1细胞/孔）下培养，通过计数形成的细胞克隆总数并评估其大小（大、中、小）来评价血清支持细胞低密度生长和存活的能力。其得分通过将待测血清的表现与Gibco澳洲血清、国产其他品牌超级血清及本公司同级别其他批次血清的平均值（均值）进行比对来确定。评分阶梯为：达到均值得70分，每降低至均值的90%、80%、70%，得分依次降至65、60、55分。若克隆数低于均值的70%，则直接降级。

细胞增殖实验（占30分）：通过计算三种典型细胞（Vero上皮样细胞、293T成纤维样细胞、SP2/0悬浮细胞）的倍增时间来评价血清促进细胞快速增殖的能力。同样与上述多家品牌血清的平均倍增时间对比，倍增时间短于或等于均值得30分，时间延长则得分依次递减为25分或20分。

最终分级标准如下：

超级胎牛血清：克隆法得分≥65分，且克隆法与增殖法总分≥90分。

特级胎牛血清：克隆法得分≥60分，且总分≥80分。

优级胎牛血清：克隆法得分≥55分，且总分≥70分。

超级新生牛血清：所有未能达到上述胎牛血清各级别标准的血清，将被划归此等级。

常见问题及解答

1、胎牛血清是否需要热灭活？

热灭活条件：56℃、30 min；

目的：灭活补体（补体所参与的反应有：溶细胞活性，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用，淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活）。

除特殊实验要求热灭活血清外，不提倡对细胞培养用血清进行热灭活。

2、更换血清的正确步骤：

如果将另一款（批）血清配制的培养基直接用于细胞培养，可能会发现以前增殖很快的细胞突然变慢甚至逐渐脱壁死亡了。这种情况下，多数为细胞被以往的培养环境驯化，突然更换一个新的营养环境，哪怕是品质更好的血清，也可能会出现不适应的情况。

更换血清遵循梯度更换，保证细胞有适应过程。

（1）如果是重新复苏细胞，建议用原培养体系进行细胞复苏。

（2）细胞恢复状态，正常传代测试，也不建议直接 100%换成新血清体系进行培养。

（3）按照比例梯度替换：新旧体系 1:3→1:1→3:1→完全替换。

（4）针对一些对培养体系较为敏感的细胞，需进一步细化替换比例。

3、出现絮状沉淀的胎牛血清还能继续使用吗？

解冻以后如果发现有絮状或者点状沉淀物，主要是由血清中的脂蛋白变性，或/和解冻后血清中残留纤维蛋白原被激活造成的，这些絮状物不会影响血清本身的质量，不会对细胞有太大的影响。可用 400×g 离心 5 min 取上清，不建议过滤去除，容易堵膜。