DNase I (含 RNA 酶抑制剂) ZS-M11009
Superbrilliant® DNase I (含 RNA 酶抑制剂)
Superbrilliant® DNase I (with Rnase Inhibitor)
Cat.No.: ZS-M11009
Superbrilliant® DNase I (with Rnase Inhibitor)
Cat.No.: ZS-M11009
组分:
储存：-20°C 可保存 2 年。
简介：本酶是将单链或双链 DNA 同等程度的随机分解，生成具有 5′-P 末端寡 核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。其原理为 DNase Ⅰ水解磷酸二酯键产生带有 5'- 磷酸基团和 3'-OH 的单核苷酸或寡核苷酸。DNase I 活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下，DNase I 可随机剪切双链 DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I 可在同一位点剪切 DNA 双链， 形成平末端，或 1-2 个核苷酸突出的粘末端。由于 DNase I (with Rnase Inhibitor) 中 Protease 已几乎被完全去除，从而提高了该酶在 pH 中性区域的稳定性。此外
该酶中添加了 RNase Inhibitor，用于抑制 RNA 样品中残留的 RNase 核酸酶， 因此可以有效抑制 RNA 提取过程中 RNase 酶对 RNA 的降解。Stop Buffer 终止反应后，可通过一步加热失活 DNase I 活性。
*该 DNase I (10 U/μl)中含有 20 U/μl 的 Rnase Inhibitor，故进行消化试验时不需 要再额外添加 Rnase Inhibitor。
活性定义
以小牛胸腺 DNA 为底物，在 25℃、pH5.0 的条件下，1 分钟内使反应液的 260nm 吸光度增加 0.001 所需要的酶量定义为 1 个活性单位（Kunitz Unit）。
纯度
10 U 的本酶和 1 μg 的 16S, 23S rRNA 在 37℃、pH7.5 的条件下反应 1 小时， RNA 的电泳谱带不发生变化.
应用：去除 RNA 样品中的 DNA 污染。
操作方法（去除 RNA 中的基因组 DNA 污染）
1. 按以下组分配制反应体系
|
RNA |
10~50 μg |
|
10× Reaction Buffer |
5 μl |
|
Rnase Free DNase I (10 U/ μl) |
1 μl* |
|
Rnase Free H2O |
Up to 50 μl |
*若 RNA 样品中含有超过 5 μg 基因组 DNA 污染，请使用 2 μl 该酶。 2. 37°C 孵育 10min 以消化去除基因组 DNA。
3. 孵育完毕后加入 5 μl 10× Reaction Stop Buffer，混合均匀室温放置 1min，并置于 75°C 10min 加热失活 DNase I 。样品可直接用于下一步反转录等试验。
注意：
1）通常加热方法即可失活 DNase I。如需要去除残留的变性蛋白，可在 37°C 消化完毕后使用酚氯仿抽提并沉淀 RNA 样品（不进行加热操作）。
2）10× Reaction Stop Buffer 中含有螯合剂用于去除二价阳离子，进行加热失活前，必须加入 5 μl 10× Reaction Stop Buffer 并混合均匀，再进行热失活，否则会导致 RNA 降解。
3）处理完毕的 RNA 样品进行一步反转录反应时，添加量需要<20%（如 20 μl
的反转录体系中加入量要<4 μl）
