WB 超能高效 RIPA 裂解缓冲液 ZS-PR21001

组分：

储存：常温保存，可保存 2 年。

根据试验情况推荐选择组合

蛋白酶及磷酸酶抑制剂组分及抑制性能

简介：WB 超能高效 RIPA 裂解缓冲液主要是从动物组织和动物细胞中抽取的可 溶性蛋白，是一种传统的组织以及细胞快速裂解液，主要用于从动物组织和哺乳 动物细胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。本产品可以用于 动物、植物的细胞或组织样品，也可以用于真菌或细菌样品。RIPA 的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay 。提取的蛋白可用于 SDS-PAGE 、Western Blot、 ELISA、酶活性分析等后续实验。

用途：用于 Western Blot  杂交的蛋白样品提取，可高效提取细胞膜、胞浆、细 胞核蛋白。不能用于 Co-IP/IP 试验。

制备 Western Blot  杂交蛋白样品

1. 对于培养细胞样品 (0.5~10× 10⁶个) ：

(1). A: 非磷酸化蛋白的提取：在使用前数分钟内向 WB Super RIPA 裂解液中， 加入蛋白酶抑制剂混合物 A (ZS-PR22005)，使其最终浓度为 1 ×。如 250μl WB Super RIPA 裂解液，加入 2.5 μl 蛋白酶抑制剂混合物 A，混合均匀，待用。  B: 磷酸化蛋白的提取：在使用前数分钟内向 WB Super RIPA 裂解液中，加入 蛋白酶抑制剂混合物 A  、磷酸酶抑制剂混合物 B  、磷酸酶抑制剂混合物 C        (ZS-PR22006)各 2.5 μl，使其最终浓度为 1 ×。如 250μl WB Super RIPA 裂解液， 加入 2.5 μl 蛋白酶抑制剂混合物 A、2.5 μl 磷酸酶抑制剂混合物 B  、2.5 μl 磷酸 酶抑制剂混合物 C，混合均匀，待用。

注意：加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂后的 WB Super RIPA 裂解液可于-20°C 保存 2 个月，性能不会有下降；加入 Benzonase 核酸酶 (ZS-PR23001) 至终 浓度为 0.25 U/μl，可有效降低样品粘度提高蛋白提取效率。

(2).  离心收集细胞，弃上清。加入 250 μl上述配制好的裂解液，枪头或旋涡振荡 混合均匀。冰上放置 30min。

(3). 样品裂解后，13,000 rpm 离心 5min，取上清，即为所提取蛋白。

2. 对于组织样品：

(4).  组织用研钵 (或匀浆器) 研磨充分至细小颗粒。

(5). 按照每 10 mg 组织加入 250 μl 裂解液的比例加入裂解液。  (如果裂解不充 分可以适当增加裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用 量)，冰上放置 30min。

(6). 样品裂解后，13,000 rpm 离心 5min，取上清，即为所提取蛋白。

(7). 提取完蛋白后可利用 BCA 蛋白定量试剂盒(ZS-PR25001)测定蛋白浓度。

Fig1. MDA-MB231 细胞 6× 105 细胞/管，每管加入 100 ul 裂解液，冰上孵育 15 min， 收集上清获取蛋白。20 mg 乳腺癌组织加入 400 ul RIPA，超声破碎获取蛋白。  100°C 煮 10 分钟使之变形，ECL 显影。