逆转录病毒包装
逆转录病毒包装是一种基因表达系统,可以将目的基因通过逆转录病毒载体稳定地整合到宿主基因组中。逆转录病毒载体具有基因组结构简单、便于基因操作、转染效率高、宿主范围广、易于分离等优点,因此在外源基因表达、基因沉默、基因治疗、生物制药等方面得到了广泛应用。
逆转录病毒包装的过程包括以下步骤:
1. 构建逆转录病毒载体:将目的基因插入逆转录病毒载体中,构成重组逆转录病毒载体。
2. 构建辅助质粒:包括编码病毒包装所需蛋白质的质粒和编码病毒外壳蛋白的质粒。
3. 包装细胞系:常用的包装细胞系包括293T或293FT细胞系,这些细胞系可以表达逆转录病毒包装所需的蛋白质。
4. 转染:将重组逆转录病毒载体和辅助质粒转染到包装细胞系中,以产生重组逆转录病毒颗粒。
5. 收集病毒颗粒:收集培养液中的病毒颗粒,并进行滴度测定和感染性鉴定。
需要注意的是,逆转录病毒包装过程中需要使用逆转录酶将RNA模板转化为DNA,以便稳定地整合到宿主基因组中。此外,逆转录病毒包装还需要使用适当的辅助质粒和包装细胞系,以确保有效地产生重组逆转录病毒颗粒。