elisa如何测定酶活
ELISA可以用于测定酶的活性,其基本原理是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,然后利用酶标记(偶联)的抗体或抗原与之孵育,加入显色剂显色,通过酶标仪测定待测物颜色与标准物颜色的差异,绘制出酶活曲线得出待测物浓度。以下为测定酶活性的步骤:
1. 将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,如聚苯乙烯等。
2. 加入待测酶溶液,使其与固相载体表面的抗原或抗体反应。
3. 清洗固相载体,去除未结合的酶溶液。
4. 加入底物溶液,酶将底物分解为产物,产生颜色变化。
5. 加入终止液,停止酶促反应。
6. 用酶标仪测定产物颜色的差异,从而推算待测酶的活性。
值得注意的是,由于ELISA测定的是抗体与抗原结合的能力,因此需要已知抗原或抗体,以便将其固定在固相载体表面。同时,也需要使用具有酶活性的抗体或抗原,以便进行显色反应并测定待测物的活性。