双抗体夹心elisa

双抗体夹心ELISA法是一种常用的免疫分析方法,用于检测样品中特定抗原的存在。其基本原理是将特异性针对待测抗原的抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中待测抗原与连接于固相载体上的抗体结合。然后加入生物素化的针对待测抗原的抗体,形成夹心。将未结合的生物素化抗体洗净后,加入HRP标记的亲和素,再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测抗原呈正相关,用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),用于样本中待测抗原浓度测算。

 

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