竞争elisa
竞争ELISA是一种常用的血清学检测方法,它的原理是基于竞争性反应,即抗原和抗体的结合反应是具有饱和性的。竞争ELISA的操作步骤如下:
1. 将已知浓度的标准品和未知浓度的样品加入到ELISA板孔中。
2. 加入酶标记物,如辣根过氧化物酶(HRP),以结合标准品和样品的抗体。
3. 加入底物溶液,显色反应发生。
4. 加入终止液,终止显色反应。
5. 用酶标仪测量每个孔的光密度值,记录下来。
6. 将光密度值与标准品的浓度进行比较,绘制出标准曲线。
在竞争ELISA中,标准曲线的形状可以是对数、指数或双曲线的曲线,也可以是单调下降的上述曲线,还可以是一条S形曲线。标准曲线的线性范围通常是样品浓度的10-100倍。在曲线范围之外的样品浓度可能会导致不准确的结果。在很多情况下,竞争ELISA反应可以拟合为4参数曲线。
值得注意的是,对于一些不典型的竞争抑制曲线,可以尝试稀释超出标准曲线范围的样本,根据标准曲线计算浓度,然后根据初始稀释值乘以相应倍数。这样可以提高样品浓度的准确性。