pull down实验原理与步骤
Pull down实验的原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和填料上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”。目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析,从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白。
Pull down实验步骤:
1. 表达纯化GST、polyHis或Biotin标记的诱饵蛋白。
2. 使用固定化亲和配体将诱饵蛋白与固相基质稳定结合。
3. 将诱饵蛋白与待测细胞裂解液进行混合孵育。
4. 通过清洗除去非特异性结合的杂蛋白,获得与诱饵蛋白相互作用的目标蛋白。
5. 通过质谱分析对目标蛋白进行鉴定。
以上步骤仅供参考,可以查阅专门文献来获得更全面和准确的信息。