elisa试剂盒步骤
ELISA试剂盒的实验步骤可以根据具体的试剂盒和应用进行调整，但通常包括以下几个主要步骤：
1. 试剂准备：根据选择的试剂盒准备好相关试剂。
2. 样品准备：血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织标本等。
3. 试剂配置
4. 抗体包被：根据产品说明书稀释抗体，每孔加入100ul预稀释的抗体，4°C过夜孵育（16-18h）。
5. 使用前，将所有试剂充分混匀，避免产生泡沫。
6. 根据实验孔（空白和标准品）数量，确定所需的板条数目。样品（含标准品）和空白都应做复孔。
7. 加样：100 μL/well 加入稀释后的 Cytokine standard 至标准品孔，100 μL/well 加入样品至样品孔，100 μL/well 加 Dilution buffer R (1×)入空白对照孔。
8. 加检测抗体：根据产品说明书加入 Biotinylated antibody 。混匀后盖上封板膜，室温孵育。
9. 洗板：扣去孔内液体，300 μL/well 加入 1×washing buffer；停留 1 分钟后弃去孔内液体。重复 3 次，每一次在滤纸上扣干。
10. 加酶：根据产品说明书加入稀释好的酶，孵育。
11. 洗板：重复步骤 5 。
12. 显色：100 μL/well 加入 TMB，室温（18-25℃）避光孵育5-30分钟之间，根据孔内颜色的深浅（深蓝色）来判定终止反应。通常显色 10-20 分钟可以达到很好的效果。
13. 终止反应：迅速 100 μL/well 加入 Stop solution 终止反应。
14. 读板：终止后 10 分钟内，用检测波长（measurement wavelength）450 nm 读值。推荐用双波长即检测波长（measurement wavelength）450 nm 、参考波长或校正波长（reference wavelength ）610-630 nm 同时读板，测量结果会更准确。
不同类型的 ELISA 实验（如直接 ELISA、间接 ELISA、竞争性 ELISA 等）可以存在微小的差异。在进行实验前，务必阅读Elisa试剂盒的详细操作指南以及相关安全事项注意事项。
