western blot实验
Western blot实验是生物化学领域中一种常用的蛋白质分析方法,其基本步骤如下:
1. **收集蛋白样品**。使用细胞裂解液,对贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品进行裂解。然后测定每个蛋白样品的蛋白浓度。
2. **电泳**。在这一步中,首先需要配制SDS-PAGE凝胶(分离胶及浓缩胶),具体配制方法可以参考一些文献资料。接着,在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以减小上样体积,在相同体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以参考相关文献资料配制,100℃或沸水浴加热3-5分钟,以充分变性蛋白。
3. **上样与电泳**。待冷却到室温后,把蛋白样品直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。