北京核小体 助力ATP
组织蛋白提取的步骤:
1. 准备裂解工作液:每1mL冷裂解液中加10μl磷酸酶抑制剂、1μl蛋白酶抑制剂和5μl 100mM PMSF,混匀,冰上保存待用。
2. 处理样品:称取约100mg组织样品,用PBS冲洗后滤纸吸干,把组织放在置于冰上的1.5ml离心管中,剪碎组织。
3. 加入冰预冷的裂解工作液,研磨组织,冰浴放置30分钟充分裂解,每10分钟颠倒混匀一次。
4. 以12000rpm,4℃离心15分钟,取上清于新的离心管中,留取5μl进行蛋白浓度测定(BCA法),剩余可加入适当体积的5×SDS loading buffer,混匀后煮沸15min,暂存于-20℃用于Western blot实验。
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