western blot 没结果
Western Blot没有结果可能有很多种原因，以下是一些常见的原因及对应的解决方案：
1. 原因：一抗和二抗不匹配。
解决方法：保证二抗与一抗宿主物种相同（如一抗来自小鼠，二抗须为抗小鼠抗体）。
2. 原因：没有足够的一抗和二抗来结合目标蛋白。
解决方法：使用高浓度抗体，4℃延长孵育时间（如过夜）。
3. 原因：封闭剂与一抗或二抗有交叉反应。
解决方法：使用温和的去污剂如吐温-20或更换封闭剂（脱脂奶粉、BSA、明胶等）。
4. 原因：一抗不识别待检物种蛋白。
解决方法：参照况明书，比对免疫原序列和蛋白序列以确保抗体和目的蛋白会发生反应，设置阳性对照。
5. 原因：抗原量不足。
解决方法：保证每条泳道蛋白上样量不低于20-30μg，使用蛋白酶抑制剂并设置阳性对照。
6. 原因：组织中目的蛋白含量低。
解决方法：浓缩样本使信号最大化。
7. 原因：转膜不充分。
解决方法：使用可逆染色剂如立春红S检测转膜结果，检查转膜操作是否正确。
8. 原因：洗膜过度。
解决方法：适度洗膜。
9. 原因：过度封闭使目标蛋白不能显色。
解决方法：预实验选择合适的封闭剂或缩短封闭时间。
10. 原因：一抗失效。
解决方法：使用新鲜抗体。
11. 原因：二抗受叠氮化纳抑制。
解决方法：避免叠氮化饷和H盯标记抗体起使用。
12. 原因：检测试剂过期或底物失活。
解决方法：使用新鲜底物。
