细胞划痕实验步骤

细胞划痕实验的步骤如下:

 

1. 实验前准备:将所有能灭菌的器械灭菌,包括直尺、marker笔等。在操作前将它们在紫外线下照射30分钟(在超净台内)。

2. 铺板:将细胞完全消化后加入完全培养基终止消化,彻底将细胞吹打均匀,然后按比例铺板。如果不均匀可以用手掌对着一横边和一纵边轻轻拍打,切忌四个边都拍打,这样细胞很容易聚到中间。

3. 掌握细胞状态,让细胞过夜能长满为佳。

4. 第二天用黄枪头比着直尺,垂直在原来的培养基里划痕,每孔1道,枪头要垂直,不能倾斜。

5. 用PBS清洗细胞1~2次,去除划下的细胞,加入低血清培养基(或者完全培养基)。

6. 去显微镜下拍照,尽量高倍镜低倍镜都拍照,可以事先在板子底部用Marker笔画上小圆圈标记来保证能拍到同一个点,作好记录。

7. 加药,放入37度5%CO2培养箱,培养时间依照实验要求进行,通常以12小时、24小时、48小时为准。

 

以上步骤仅供参考,建议根据具体的实验操作进行相应调整。

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