流式细胞仪检测细胞周期
流式细胞仪(Flow Cytometry,FCM)可以通过PI染色法对细胞内DNA含量进行检测,将细胞周期各时相区分为G1/G0期、S期和G2/M期,计算各时相的细胞百分率。
具体步骤如下:
1. 细胞培养: 取对数生长期的细胞,按一定数量接种于培养板内,进行所需的处理(比如加入药物),特定时间后终止培养。
2. 细胞固定: 将细胞离心收集,用预冷PBS洗涤两次,加入预冷75%乙醇,于4℃固定4h以上。
3. 细胞染色: 离心收集细胞,用3mL的PBS洗涤一次,加入PI染液(engreen),与RNA酶混合,4℃避光孵育30min。
4. 流式分析: 用流式细胞仪检测,一般计数2~3万个细胞,结果用细胞周期拟和软件分析。