流式细胞仪检测细胞凋亡

流式细胞仪可以用来检测细胞凋亡,常用的方法是Annexin V和PI双染法。

 

具体步骤如下:

 

1. 按照实验方案处理细胞;

2. 消化离心收集细胞至离心管中;

3. 用PBS洗2遍;

4. 用双蒸水稀释5 × Binding Buffer为1 × Binding Buffer,每管加入500μl 1 × Binding Buffer重悬细胞;

5. 每管加入5μl Annexin V-FITC和10μl PI染料,混匀;

6. 室温避光孵育5min;

7. 过膜,流式细胞仪检测。

 

最终的结果图主要将细胞分为3种状态的细胞,左下:存活的细胞;右下:早期凋亡的细胞;右上:晚期凋亡的细胞。可以根据三种状态下相应的细胞百分比绘制柱状图进行分析。

 

注意事项:要准备单染管、仪器需要调补偿、对待细胞轻柔一点,然后动作尽量要快,细胞们也想早早完成它们的使命。

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