原代心肌细胞培养
原代心肌细胞培养的步骤如下：
1. 准备相关试剂和器材。无菌DMEM培养基（含15%的胎牛血清）、青霉素、链霉素、胶原酶、透明质酶、二甲基亚砜（DMSO）、磷酸盐缓冲液（PBS）、台盼蓝染色剂等，以及细胞培养皿、细胞计数板、移液管、离心管等器材。
2. 取材：将新生24h内的SD大鼠10只处死，体积分数为75％的乙醇浸泡消毒 2遍，每次约8秒。将心脏剪成约0.5mm×0.5mm×0.5mm的组织块放进无菌锥形瓶中，加入适量质量分数为0.08％的胰蛋白酶，放入37℃水浴锅中消化，转子转速约90~100转/分。
3. 终止消化：第1次消化8分钟后静置弃上清。剩余组织进行多次消化，每次2分钟，收集每次消化后的上清液，直至全部组织消化完全。
4. 终止消化并清洗：向上清液中加入适量体积的DMEM培养基（含15%的胎牛血清）以终止上清液中残余胰蛋白酶的消化作用，防止损伤细胞，保证成活率。将离心管中的细胞悬液用PBS清洗2次。
5. 接种和培养：根据台盼蓝染色结果及细胞计数结果调整细胞密度，以约5×10^8个细胞/ml密度接种到培养板或培养瓶中，放入37℃的温箱中培养。
6. 换液：24小时后用D-Hanks液或磷酸盐缓冲液轻轻冲洗去未贴壁的细胞，可得到视野清晰、密度均匀的贴壁心肌细胞。
