原代细胞提取
原代细胞的提取主要包括以下步骤:
1. 取材:选择适当的组织,并将其尽可能在4~6小时内处理成细胞。如果不能及时进行培养,可将组织浸泡在培养液内,放置于冰浴或4℃冰箱中。对于较大的组织块,应先将其切成1cm3以下的小块再低温保存。注意严格无菌操作。
2. 剪碎组织:对于纤维成分很少的脑组织、部分胚胎组织等,可以用剪刀剪碎至1mm3的组织块。操作时要尽量减少对细胞的机械损伤。
3. 消化:采用胰蛋白酶或胶原酶等消化剂将组织进行消化处理,然后通过离心等方法将细胞分离出来。
4. 清洗和重悬:离心沉淀用无钙、镁的PBS清洗后,用培养基重悬,并调整适当细胞浓度。
5. 分瓶培养:将细胞分至多个培养瓶中培养。