原代神经元细胞培养
原代神经元细胞培养的步骤如下：
1. 材料选择：严格按照国际上NCBI数据库或其他文献的材料一致。
2. 培养基选择：推荐使用Invitrogen/GIBCO无血清培养基Neurobasal（neurbasal-A），需要的添加剂为B27和谷氨酰胺。Neurobasal是胎鼠培养基，而-A为新生鼠培养基。
3. 仔鼠操作：仔鼠（新生7d以内）直接浸泡于75%酒精中，-20℃冰箱低温消毒10min左右，动物失去知觉即可开始取材。
4. 皮层组织的分离：新生鼠使用眼科剪将动物断头，并用镊子剥除头部的皮肤。在D-PBS液中沿颅骨人字缝从后向前剥离。
5. 组织的分散：用管口较粗的弯头滴管吸去带有脑膜的D-PBS，尽最去除干净液体并避免吸走组织。用虹膜剪将组织逐撮均匀剪成乳糜状，使组织块为1mm3的大小为宜。加入合适体积的消化液（一般盖过组织块并且可以随意摇晃即可），并均匀分散组织，放入37°C孵育箱中消化约15min（每间隔3-5min用手轻轻摇晃1次，动物胎龄越小，越容易分散，消化时间可相应缩短）。
6. 单细胞悬液的制备：用口径较粗的弯头滴管将消化好的组织吸入含3-5ml完全培养基的10ml离心管中，静置5min左右。
以上步骤仅供参考，建议按照专业文献或者咨询专业人士进行操作。
