原代肝细胞提取
原代肝细胞提取需要遵循以下步骤:
1. 麻醉小鼠(小鼠年龄最好年轻一些),喷酒精,擦干后固定小鼠 (无菌最重要啦~)
2. 打开小鼠腹腔,找到肝门静脉和下腔静脉,开腹过程一定要注意防止鼠毛进入腹腔。可以将身体两侧皮肤用针头翻到侧旁后,用针头固定,可使腹腔尽可能暴露,便于寻找血管和观察肝脏灌流、消化情况。
3. 准备4套剪刀镊子,高温高压灭菌(分别用于剪皮,开腹,剪断下腔静脉和剪下肝脏,肝脏剪碎)。
4. 用配置好的灌流液,消化液(一定要37℃预热)进行灌流,使肝脏消化。
5. 用重悬过程中用的DMEM一定要预冷清洗,然后用0.22 μm滤网过滤除菌后得到细胞悬液。
6. 调整细胞悬液的浓度,进行细胞计数和活力鉴定。
以上是原代肝细胞提取的简要步骤仅供参考,如果要做原代肝细胞培养,还需要进行细胞接种、培养和传代等步骤。