软骨细胞原代培养
原代软骨细胞培养的步骤如下：
1. 用0.25%胰蛋白酶先消化30～35分钟，PBS浸洗2遍。
2. 置于50ml玻璃培养瓶，加0.1％Ⅱ型胶原酶(DMEM配制)，37℃消化3.5～4.5小时，每小时置37℃恒温振荡箱振荡5min，直到软骨块大部分呈肉眼可见的絮状物。
3. 倒置显微镜下观察，软骨细胞大部分分离后，用弯头吸管轻轻吹打，细胞悬液以1200r/min离心7分钟，弃上清。
4. 以含10％新生牛血清DMEM的培养液终止消化，离心弃上清以洗去细胞表面的酶。
5. 悬浮细胞并计数，台盼蓝染色检测细胞活力为90％。
6. 将细胞以2×10^5/ml接种于25cm^2培养瓶内，置于37℃恒温, 5％CO2浓度,饱和湿度培养箱内培养。
7. 2天后换液1次，以后隔天更换培养液，倒置显微镜观察、照相记录细胞形态及贴壁生长情况。
