大鼠原代成纤维细胞
对于大鼠原代成纤维细胞的提取,可以参考以下步骤:
1. 取大鼠,在无菌环境下打开胸腔,取出肺组织,注入盛有无菌1×PBS的培养皿中,洗净组织表面的血液。
2. 将清洗干净的组织转入装有75%酒精的培养皿中浸泡15s以杀死大多数的肺组织细胞,浸泡完成后立即转入装有无菌1×PBS的培养皿中震荡清洗。
3. 用剪刀镊子配合剪除肺部的其他组织,仅保留肺膜部分,再次用1×PBS清洗去除残留的组织块。
4. 用无菌的切割器将肺膜部分切割为2-3mm×2-3mm的小块,加入含有青霉素、链霉素的PBS中浸泡5min后,弃去PBS,加入含有青霉素、链霉素的0.25%胰蛋白酶消化液,消化时间根据实际状况判断,一般约10-20min。
5. 加入数毫升FBS终止消化,之后吸弃液体,加PBS清洗组织块1次后,用200ul吸头将组织块平均接种于T-25培养瓶的培养面上,之后将培养瓶放置于37℃二氧化碳培养箱中培养。
以上步骤仅供参考,建议阅读相关论文以获取更准确和全面的信息。