成纤维细胞原代培养
成纤维细胞原代培养的步骤如下：
1. 在无菌环境下，从-80℃冰箱中取出冻存的细胞，迅速放入37℃的水浴锅中，快速晃动，使冻存液迅速融化。
2. 继续晃动冻存管，至冰晶完全融化。
3. 用75%医用酒精擦拭冻存管外表面。
4. 在超净台中打开冻存管，用巴氏吸管或移液枪吸取细胞冻存悬液，转移至先前准备的离心管中。
5. 用1mL完全培养基洗涤冻存管1次，收集残留的细胞，减少损失。
6. 将细胞接种到1个T25培养瓶或底面积相当的培养容器中。加入足量完全培养基。1个T25培养瓶中培养基总量不少于5 mL。
7. 摇匀细胞，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的CO2培养箱中。注意接种2h内不可移动、观察细胞，这会严重影响细胞贴壁，造成状态不佳、细胞聚团、贴壁不均匀等情况。
8. 复苏次日，观察细胞状态，并更换新鲜的完全培养基或传代。
9. 之后，每2天更换一次完全培养基，直到细胞生长至90%汇合，即需传代。
以上步骤仅供参考，建议按照专业文献或者咨询专业人士进行操作。
