miRNA mimics 合成
miRNA mimics(miRNA模拟物)的合成通常有两种常见的方法:化学合成和体外转录。
1. 化学合成:miRNA mimics的化学合成是通过无水合肽合成法来合成。首先,需要获得目标miRNA的序列,并根据该序列设计miRNA mimics的引物。然后,使用化学合成方法合成miRNA mimics的单链RNA。合成过程中,使用保护基团来控制核苷酸的顺序以及碱基的修饰,如甲基等。最后,通过去保护基团来得到纯化后的miRNA mimics。
2. 体外转录:miRNA mimics的体外转录是通过将目标miRNA的DNA模板体外转录合成miRNA mimics。首先,需要获得目标miRNA的DNA模板,通常通过使用反转录酶将miRNA逆转录成cDNA。然后,在得到的DNA模板上使用RNA聚合酶,例如T7 RNA聚合酶,进行体外转录合成miRNA mimics的RNA链。最后,进行纯化和浓缩,以得到纯化后的miRNA mimics。
无论是哪种方法,合成的miRNA mimics都需要进行质控和纯化步骤,以确保其质量和纯度。此外,费用和难度方面化学合成比体外转录要高一些,所以选择具体的合成方法可以根据实验室的资源和需求来决定。