提取293t细胞rna
提取293T细胞RNA的方法如下:
1. 培养293T细胞:将293T细胞在含有10%血清和抗生素的RPMI 1640培养液中培养至对数生长期。
2. 收集细胞:轻轻摇动培养瓶,使细胞悬浮,将细胞转移至15ml离心管中,离心1000rpm,5分钟。
3. 去除培养液:用吸管轻轻吸去上清液,不要留下沉淀物。
4. 清洗细胞:加入含有1×PBS和0.5% Triton X-100的清洗液,涡旋混匀,离心1000rpm,5分钟。
5. 去除清洗液:用吸管轻轻吸去上清液,不要留下沉淀物。
6. 裂解细胞:加入RNA裂解液,涡旋混匀,静置5分钟。
7. 提取RNA:将裂解的细胞样品转移到1.5ml EP管中,加入等体积的氯仿,混合均匀后静置10分钟。
8. 离心:离心12000rpm,15分钟,此时RNA主要在氯仿的上层。
9. 移液:用枪吸取上层RNA溶液到新的EP管中,加入等体积的异丙醇,混合均匀后静置10分钟。
10. 离心:离心12000rpm,15分钟,此时RNA在异丙醇的底部。
11. 干燥:倒掉异丙醇,用75%乙醇清洗RNA沉淀,晾干。
12. 溶解RNA:加入适量DEPC处理过的水溶解RNA。
以上步骤仅供参考,可以查阅专门的操作指南或者文献来获取更详细准确的信息。