rna提取试剂配制
外泌体提取RNA的方法,一种常用的方式是通过超速离心法。这是目前外泌体分离的金标准,适用于大体积样本。以下是提取的步骤:
1. 取出洗涤液,按以下操作:洗涤液A:21mL加入9mL无水乙醇;42mL加入18mL无水乙醇,混匀。洗涤液B:9mL加入21mL无水乙醇;18mL加入42mL无水乙醇,混匀。配制好的洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。
2. 取无RNA酶的1.5mL离心管,加入200μL外泌体样本,再加入200μL裂解液及20μL消化液,漩涡震荡10秒,充分混匀,65℃水浴10分钟。
3. 将吸附柱放入收集管内,将700μL上述溶液转入吸附柱内,12,000rpm 4℃离心1分钟,弃收集管内废液;将剩余溶液转移至吸附柱内,12,000rpm 4℃离心1分钟,弃收集管内废液。
4. 将吸附柱放回收集管内,加500μL洗涤液A至吸附柱内,静置2分钟,12,000rpm 4℃离心1分钟,弃收集管内废液。
5. 加入500μL洗涤液B至吸附柱内,静置2分钟,12,000rpm 4℃离心1分钟,弃收集管内废液。
6. 加入500μL无水乙醇至吸附柱内,静置2分钟,12,000rpm 4℃离心1分钟,弃收集管内废液。
7. 用真空泵抽真空干燥吸附柱。
8. 将吸附柱放回收集管内,加入30-50μL的DEPC处理过的水至柱子中央,室温放置5分钟。
9. 用真空泵抽真空干燥吸附柱。
10. 用枪吸取洗涤液B清洗柱子3次。
11. 用真空泵抽真空干燥吸附柱。
12. 用枪吸取30-50μL的DEPC处理过的水清洗柱子3次。
13. 用真空泵抽真空干燥吸附柱。
以上就是外泌体提取RNA的一种方式,您可以咨询专业人士或查阅文献来了解更多相关方法和技术。