真菌rna提取
RNA提取是实验室中常用的方法之一，以下是一种常见的RNA提取方法，称为酚/氯仿法（Phenol/Chloroform Extraction）：
材料和试剂：
1. 细胞或组织样品
2. TRIzol试剂（或类似的RNA提取试剂）
3. 高纯度酚和氯仿
4. 75% 乙醇
步骤：
1. 将细胞或组织样品收集在离心管中。
2. 加入适量的TRIzol试剂，根据样品数量和大小而定，一般推荐使用1mL TRIzol per 1x10^6细胞。
3. 使用200-1000μL的枪头垫在样品中反复擦拭，以确保细胞或组织充分裂解。注意，应尽量避免产生泡沫。
4. 在室温下孵育样品5分钟，以便TRIzol充分裂解细胞。
5. 添加0.2体积的高纯度酚（如Phenol:Chloroform:Isoamyl Alcohol = 25:24:1）至样品中，并充分混合。
6. 离心样品10-15分钟（4℃，12000g），使混合物分为两个相分离层：上层是无机相（包含DNA和RNA），下层是有机相（包含蛋白质）。
7. 将上层转移至新的离心管中。注意，尽量避免带入有机相。
8. 添加等体积的氯仿，轻轻混合。
9. 再次离心样品10-15分钟（4℃，12000g），以分离RNA和DNA。
10. 将上层水相转移至新的离心管中，加入相同体积的75% 乙醇混合。
11. 混合液在-20℃冷冻20分钟，使RNA充分沉淀。
12. 离心样品10-15分钟（4℃，12000g），去除乙醇。
13. 加入适量的70% 乙醇洗涤RNA，使RNA得到最大程度纯净化。
14. 再次离心样品10-15分钟（4℃，12000g），去除乙醇。
15. 将离心管倒置至纸巾上，静置至RNA空干。
16. 加入适量的离心管中使用RNase-free水重溶RNA。
注意事项：
1. 安全使用酚和氯仿，避免直接接触皮肤和黏膜。
2. RNA提取操作应在无RNase的环境中进行，使用无RNase的试剂和仪器，并配戴手套。
