全血rna提取

全血RNA提取是从血液样本中提取RNA的方法。以下是常用的全血RNA提取方法:

 

1. 血液采集:使用抗凝剂(如EDTA或Citrate)处理血液样本,避免凝血。以血液体积的2倍加入抗凝剂,并轻轻混合。

 

2. 细胞裂解:将采集的全血样本转移到离心管中,并加入一个适当的细胞裂解缓冲液(如TriZOL、RNAiso Plus等)进行细胞破碎。可以通过轻轻倾斜和摇晃离心管,使血液与细胞裂解缓冲液充分混合。

 

3. 长时间存放:在细胞裂解后,将混合物放置在室温下静置5-10分钟。这个步骤有助于纳米粒子的形成,以提高RNA提取的产率。

 

4. 有机溶剂添加:加入等体积的含有裂解脂质和蛋白质的有机溶剂(如氯仿、异丙醇等),轻轻颠倒15-20次,彻底混合。

 

5. 全血RNA分离:离心管离心10-15分钟,以分离上清液(含截断RNA和蛋白质)和有机溶剂相。上清液中包含大多数RNA,可以用于后续纯化。

 

6. RNA纯化:使用RNA纯化试剂盒或柱进行RNA纯化。将上清液转移到RNA纯化试剂盒或柱中,按照厂商指南进行纯化步骤。这些试剂盒或柱会去除RNA提取过程中的杂质,如蛋白质和DNA,并集中RNA,提高浓度。

 

7. DNase处理:使用DNase I酶消除残余的DNA污染。将DNase I酶加入RNA样品,并根据厂商指南进行消化步骤。

 

8. RNA浓缩:使用RNA浓缩试剂或离心浓缩方法浓缩RNA溶液,从而提高RNA的浓度。

 

最后,使用比色法(如NanoDrop)或荧光分析方法(如Qubit)测量提取的RNA浓度,确保RNA的质量和浓度。

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