动物组织rna提取过程
动物组织RNA提取过程通常与细胞RNA提取过程类似,下面是一种常见的动物组织RNA提取方法(基于Trizol试剂)的步骤:
1. 收集组织样品:将需要提取RNA的动物组织样品收集到离心管中。可以是新鲜组织或冻存样品。
2. 切碎组织:使用无RNase的器具将组织切碎成细小颗粒。可以使用刀片、剪刀或动物组织研磨器等。
3. 加入Trizol试剂:向离心管中加入适量的Trizol试剂,通常是以组织重量的体积比例进行配比。快速而均匀地混合组织样品和Trizol试剂,使其完全润湿。
4. 组织裂解:将组织和Trizol混合液在室温下静置5分钟,使细胞和细胞器的细胞膜破裂释放RNA。可以轻轻颠倒离心管促进裂解。
5. 加入氯仿:加入相等体积的氯仿到混合液中,然后充分混合。这一步是为了将DNA和蛋白质分离出来。
6. 混匀:充分混合混合液,并保持室温静置5分钟,使混合液进行相分离。
7. 离心:将混合液以高速离心(通常为12,000 x g)约15分钟,使混合液分离成三个层次:上清液(RNA)、界面层(DNA和蛋白质)和有机相(脂质和蛋白质)。
8. 收集RNA:将上清液(RNA)小心地转移到另一个无RNase的离心管中。可以使用pipette,但要小心不要吸入界面层。
9. 沉淀RNA:将等体积的异硫酸盐酒精溶液(如异丙醇)加入RNA溶液中,然后轻轻倒置混合,使RNA沉淀出来。
10. 离心:以高速离心(通常为12,000 x g)约10分钟,沉淀RNA。
11. 清洗RNA:将上清液去除,用70%乙醇洗涤RNA沉淀,去除异丙醇、盐等污染物。然后以适当速度离心(通常为7,500 x g)洗涤。
12. 干燥:将离心管打开,倒置在吸水纸或纸巾上,让RNA在室温下迅速干燥。
13. 重溶:使用适当的缓冲液(如RNase-free水)重溶RNA沉淀。可以根据后续实验需要来选择缓冲液。
请注意,在整个过程中,保持样品和试剂的无菌和无RNase的环境,以防止RNA的降解和污染。同时,根据不同的组织类型和特性,可能需要进行额外的步骤,如组织裂解缓冲液的优化、使用细胞破碎器进行组织破碎等。因此建议在使用前仔细阅读相关的试剂盒说明书,并遵循指导。