trizol提取rna步骤

使用Trizol提取RNA的步骤如下:

 

1. 准备样品:选择合适的样品,如细胞或组织,并收集到含有Trizol的离心管中。注意避免与RNase接触。

 

2. 细胞或组织裂解:使用均匀、彻底的方式将细胞或组织裂解,以确保完全释放RNA。可以使用细胞裂解缓冲液或Trizol直接裂解。

 

3. 混合和孵育:将细胞裂解液与Trizol充分混合,然后放置在室温下孵育5分钟,以允许RNA充分溶解。

 

4. 加入氯仿:加入等体积的氯仿到混合物中,充分摇匀以分离出水相和有机相。氯仿可将DNA和蛋白质分离到有机相中,而RNA会分离到水相中。

 

5. 离心:将离心管放入离心机中,以高速(通常为12,000-16,000 x g)离心15分钟,以分离出上清液(含有RNA)和有机相。

 

6. 乙醇沉淀:将上清液转移到新的离心管中,并加入等体积的冷乙醇,然后缓慢倒置离心管,等待RNA沉淀。乙醇会使RNA沉淀下来。

 

7. 洗涤:用70%乙醇洗涤RNA沉淀,可多次洗涤,目的是去除污染物和盐。

 

8. 去除乙醇:使用低温离心去除乙醇,尽量避免过分离心和长时间悬挂。

 

9. 溶解RNA沉淀:加入RNase-free水溶解RNA沉淀,使其完全溶解。

 

10. RNA保存:将RNA样品以适当的方式保存,如冷冻保存在-80°C或以RNase-free水溶解并保存在-20°C。

 

以上是使用Trizol提取RNA的典型步骤,具体操作可能根据实验室的要求和试剂盒的说明略有变化。在使用Trizol进行RNA提取之前,建议详细阅读相关文献和试剂盒的说明书,并遵循准确的操作步骤。

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