rna快速提取试剂盒
Trizol提取细胞RNA的步骤如下:
1. 收集细胞样品:将要提取RNA的细胞样品收集到离心管中。可以是培养细胞或组织样品。
2. 加入Trizol试剂:向离心管中加入适量的Trizol试剂,通常是以细胞数量的体积比例进行配比。快速而均匀地混合悬浮细胞和Trizol试剂。
3. 离心:将混合物在室温下离心10分钟,以降低细胞碎片的含量。通常使用相对较低的速度(约为12,000 x g)。
4. 加入氯仿:从混合物中取出上清液(上层液体),加入相等体积的氯仿,然后充分混合。这一步是为了将DNA分离出来。
5. 混匀:充分混合混合液,并保持室温静置5分钟,使混合液进行相分离。
6. 离心:将混合液以高速离心(通常为12,000 x g)约15分钟,将混合液分离成三个层次:上清液(RNA)、界面层(DNA和蛋白质)和有机相(脂质和蛋白质)。
7. 收集RNA:将上清液(RNA)小心地转移到另一个无RNase的离心管中。可以使用pipette,但要小心不要吸入界面层。
8. 沉淀RNA:将等体积的异硫酸盐酒精溶液(如异丙醇)加入RNA溶液中,然后轻轻倒置混合,使RNA沉淀出来。
9. 离心:以高速离心(通常为12,000 x g)约10分钟,沉淀RNA。
10. 清洗RNA:将上清液去除,用70%乙醇洗涤RNA沉淀,去除异丙醇、盐等污染物。然后以适当速度离心(通常为7,500 x g)洗涤。
11. 干燥:将离心管打开,倒置在吸水纸或纸巾上,让RNA在室温下迅速干燥。
12. 重溶:使用适当的缓冲液(如RNase-free水)重溶RNA沉淀。可以根据后续实验需要来选择缓冲液。
以上步骤仅为基本操作步骤,不同实验室或试剂盒可能有所不同,建议在使用前仔细阅读相关的试剂盒说明书,并遵循指导。同时,注意在整个过程中保持样品和试剂的无菌和无RNase的环境,以防止RNA的降解和污染。