ctab提取植物rna

CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法是一种常用的提取植物RNA的方法。下面是CTAB法提取植物RNA的步骤:

 

1. 准备样品:从植物材料中采集RNA所需的组织部位,如叶片、花朵等。新鲜样品或者经过快速冷冻保存的样品通常提取RNA效果更好。

 

2. 粉碎样品:将样品在液氮中快速粉碎,或者使用研钵和研磨器进行粉碎。确保样品彻底粉碎,并且样品处于冰上以保持低温。

 

3. 加入提取缓冲液:将粉碎样品转移到离心管中,添加适量的CTAB提取缓冲液(含有CTAB、PVP、EDTA等成分)。缓冲液的配制可以根据实验室使用的协议或文献进行。

 

4. 高盐处理:加入适量的高盐溶液(如NaCl)促使DNA沉淀。

 

5. 脂肪酸提取:加入等体积的氯仿:异丙醇混合液,轻轻颠倒管子混匀,形成两相体系。

 

6. 离心:将混合液离心,分离上层的水相和下层的有机相。

 

7. RNA沉淀:将上层的水相转移至新的离心管中,加入等体积的异丙醇,充分混合。

 

8. 沉淀RNA:离心样品,将RNA沉淀到离心管底部。

 

9. 洗涤和纯化:使用75%乙醇洗涤RNA沉淀,移去盐和污染物。然后使用RNase-free水重新溶解RNA。

 

10. RNA储存:将提取得到的RNA保存在低温(-80°C)中,或者在液氮中快速冻存。

 

CTAB法是通过特殊的缓冲液和脂肪酸提取步骤,使得DNA被沉淀而RNA溶于上层水相,从而实现RNA的提取。该方法适用于大部分植物材料,但需要注意的是,不同植物的RNA含量和质量可能会有差异,因此提取条件可能需要调整。此外,还需要注意使用RNase-free的试剂和仪器设备,以避免RNA的降解。

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