catb法提取rna
CATB法(Chloroform-Agitate-Triton X-100-Buffer)是一种简单、快速的RNA提取方法,适用于从细胞、组织或全血样本中提取RNA。
以下是CATB法的步骤:
1. 细胞/组织裂解:将细胞/组织样本转移到离心管中,并加入适量的细胞裂解缓冲液(如TRIzol、RNAiso Plus等)或裂解缓冲液(含有甘胆酸盐或与其类似的清液状物)进行细胞破碎。使用移液管多次吸吮和排空混合物,以确保细胞或组织样本完全裂解。
2. 加入氯仿:加入等体积的氯仿。轻轻颠倒混合物,使其充分混合。氯仿会分离出蛋白质和DNA,同时保留RNA在上清液中。
3. 离心:将混合物离心10-15分钟,在离心过程中形成两个相,上层为无色上清液(含有RNA),下层为红色有机层(含有DNA)。
4. 收集RNA上清液:使用移液器将上清液转移到新的离心管中。避免将有机相带入RNA上清液中。
5. 洗涤RNA上清液:加入等体积的异丙醇(或乙醇),轻轻颠倒混合。将混合物离心10分钟,倒掉上清液。重复此步骤1-2次,以去除残余的氯仿和其他杂质。
6. 干燥:将管子打开口,在室温下保持开放3-5分钟或使用负压将液体吹干。注意不要使RNA过度干燥,避免降低RNA的质量。
7. 重悬:使用适量的RNase-Free水(或其他合适的缓冲液)重悬RNA沉淀。将管子轻轻颠倒数次,使RNA完全重悬。
8. 质量和浓度检测:使用比色法(如NanoDrop)或荧光分析方法(如Qubit)测量提取的RNA浓度,确保RNA的质量和浓度。
需要注意的是,CATB法提取的RNA可能包含一定量的DNA和蛋白质,如果需要纯净的RNA样品,可以使用进一步的纯化方法(如RNA纯化试剂盒或柱)进行处理。