rna提取后怎么测浓度
测定RNA提取后的浓度可以使用光度法、比色法或荧光法等不同的方法。以下是一种常用的光度法测定RNA浓度的方法:
1. 准备工作:将紫外(UV)可见光分光光度计预热至所需波长(一般为260 nm)。
2. 获得样本:将提取后的RNA样本转移到适合的量级管或微量比色皿中,并确保样本均匀混合。
3. 设置光度计:在光度计上选择测量核酸的光波长(260 nm),并校准光度计至零基线。
4. 测量样本:将样本转移至光度计比色皿中,确保没有气泡和杂质,并用盖子盖上。
5. 记录读数:通过读取光度计上的吸光度值(A260)记录样本的吸光度。
6. 计算浓度:使用下述方程计算样品的RNA浓度:C (μg/μL) = A260 × 40 (ng/μL)。
注意事项:
- 光度法测定浓度时,需要注意样本的纯度。纯度通常由A260/A280比率表示,标准纯RNA样本通常具有1.8-2.0的A260/A280比率。较低的A260/A280比率可能表示有蛋白质污染。
- RNA测量时应避免污染和外部因素的影响,确保准确性和可靠性。可以通过进行空白测量(只使用溶剂)和使用纯化的RNA标准品进行校准来验证测量结果的准确性。
- 如果需要进一步验证RNA的完整性和稳定性,可以进行凝胶电泳分析或使用其他核酸分析方法,如聚合酶链反应(PCR)或实时定量PCR(qPCR)来测定RNA的质量和含量。