rna提取trizol
Trizol是一种常用的RNA提取试剂,其基本原理是通过裂解细胞膜和核膜,使RNA释放出来,并通过乙醇沉淀的方式进行纯化。以下是使用Trizol进行RNA提取的步骤:
1. 样品收集:收集新鲜的样品,比如组织样品或细胞样品。
2. 样品裂解:将样品加入含有Trizol的离心管中,按照Trizol试剂的比例加入。悬浮混合液体,让Trizol完全裂解细胞膜和核膜,释放RNA。
3. 提取:将样品与Trizol充分混合,使细胞裂解并将RNA释放出来。此步骤可以使用离心管摇床或枪头摇床进行。
4. 分离:加入氯仿,在高速离心下分离混合物,形成上清液(包含RNA)、中间的白色界面(包含DNA和蛋白质)和有机相(Trizol和溶解的脂质)。
5. 收集上清液:小心转移上清液(含有RNA)至新的离心管中,避免带入有机相。可添加同体积的异丙醇。
6. 沉淀:加入乙醇,使RNA沉淀。将试管倾斜,慢慢添加冷乙醇,稍微轻轻摇晃试管,使RNA沉淀。
7. 洗涤:使用70% 乙醇洗涤沉淀的RNA,可去除杂质和盐。
8. 干燥:将试管瓦氏吸水纸放入离心管中,将液体吸干。
9. 溶解:加入适量的去氧核糖酸等缓冲液溶解RNA,使其在实验中易于操作。
10. 质量检测:使用分光光度计或其他方法检测提取的RNA的浓度和纯度。
这是使用Trizol进行RNA提取的基本步骤,可以根据实验室的具体要求和Trizol试剂盒的说明进行微调和优化。