异丙醇提取rna
异丙醇(isopropanol)可以用来沉淀RNA。以下是使用异丙醇提取RNA的一般步骤:
1. 细胞裂解:将含有RNA的样品(比如细胞悬液)加入适当的裂解缓冲液(如TRIzol),并彻底混合。
2. 加入异丙醇:在样品中加入相同体积的冷异丙醇,并彻底混合。
3. 沉淀RNA:将混合物保持在-20°C或更低的温度下沉淀RNA。此过程通常需要15分钟至数小时的时间。
4. 离心:使用高速离心,通常在12000-16000 x g下,将混合物离心10-20分钟。转速和离心时间可能需要根据实验条件进行调整。
5. 去除上清:从离心管底部小心倒出上清液,注意不要损失RNA沉淀。
6. 洗涤:使用70%乙醇进行一次或多次洗涤,可帮助去除杂质。在每次洗涤过程中,先加入少量70%乙醇,轻轻混合,然后再次离心沉淀RNA。
7. 干燥:将离心管打开,或将离心管倒置于干燥室中,待RNA干燥。
8. 溶解:使用RNase-free TE缓冲液、水或其他适当的溶解液,溶解干燥的RNA。
注意事项:
- 在RNA提取过程中使用无菌技术,并使用RNase-free材料和缓冲液,以避免RNA降解。
- 操作时避免过度搅拌,以免产生过多的DNA和脂肪酸污染。
- 在取出上清液时要小心,以免扰乱沉淀。
- 严格遵守异丙醇的安全操作规程,并将其储存在适当的条件下,避免火灾和其他安全风险。
- RNA提取后的沉淀应储存在-80°C的冰箱中,以保持其完整性。