细胞进行rna提取
以下是一种常见的大肠杆菌RNA提取的方法:
1. 培养细菌:在适当的培养基中培养大肠杆菌细菌,使其达到合适的生长阶段(通常是对数生长期)。
2. 收集细菌:将培养液转移到离心管中,离心液体以收集细菌细胞。将上清液去除,留下细菌细胞沉淀。
3. 细胞裂解:向离心管中加入适量的裂解缓冲液,例如TRIzol,然后充分混合,使细菌细胞完全裂解释放RNA。可以使用搅拌器或超声波破碎机来辅助裂解。
4. 加入溴酚/氯仿混合液:加入相同体积的溴酚/氯仿混合液(比如查尔酮),并轻轻摇动离心管混合均匀。
5. 离心:将离心管离心,以分离混合液中的上层水相(含有DNA和RNA)和下层有机相(含有脂肪和蛋白质)。
6. 收集上层水相:使用移液管将上层水相转移到新的离心管中。
7. 加入异丙醇:向上层水相中加入相同体积的异丙醇(约为0.5卷),并轻轻混合均匀。
8. 离心:将离心管离心,以沉淀RNA。RNA沉淀在离心管中,形成一个透明的、粘稠的白色沉淀。
9. 去除上清:小心地倒掉上清液,尽量避免干扰RNA沉淀。
10. 洗涤:向RNA沉淀中加入75%乙醇,轻轻混合,然后再次离心。去除上清液。
11. 干燥:让沉淀在室温下风干,以去除乙醇残留。
12. 重溶:用RNase-free水或缓冲液(如RNase-free TE缓冲液)溶解RNA沉淀,使其浓度适合后续实验。
请注意,在操作中应避免RNA受到RNase污染,在操作RNA时应使用经过RNase去污染的试剂和设备,并在一切操作中保持RNase-free环境。