外周血提取rna

提取外周血中的RNA是一种常见的实验操作,以下是一般的步骤:

 

1. 血液采集:使用合适的血液采集管(例如EDTA抗凝管)采集外周血样品。将血液转移至离心管中。

 

2. 混匀:快速而轻柔地混匀样品,以保持血液中细胞和RNA的均匀分布。

 

3. 溶解红细胞:加入等体积的红细胞溶解液(例如红细胞裂解液)至血液样品中,并轻轻倒置离心管几次,使其充分混合。

 

4. 血细胞裂解:将离心管放置在4°C的冰上静置10-15分钟,使红细胞溶解液能够充分裂解红细胞,释放血细胞内的核酸。

 

5. 离心:将样品在室温或冰上以适当的速度(一般为2000-3000 × g)离心10-15分钟,使红细胞残渣和细胞碎片沉淀到管底。

 

6. 转移上清液:将上清液转移到新的离心管中,避免搅动上清液底部的细胞残渣。

 

7. 离心:将上清液在高速离心(一般为12000-14000 × g)下离心10-15分钟以沉淀细胞碎片和大分子物质。

 

8. 转移上清液:小心地将上清液转移到新的离心管中,避免搅动沉淀。

 

9. 加入酚/氯仿:加入等体积的酚/氯仿试剂,轻轻混匀以分离RNA。

 

10. 离心:将样品在室温或冰上以适当的速度离心10-15分钟,使酚/氯仿溶液分离为上层的水相和下层的有机相。

 

11. 转移上层水相:小心地将上层水相转移到新的离心管中。

 

12. 沉淀RNA:加入等体积的异丙醇或乙醇,并轻轻混匀,使RNA沉淀。

 

13. 离心:将样品在室温或冰上以适当的速度离心10-15分钟,以沉淀RNA。

 

14. 去除上清液:小心地倒出上清液,避免损失RNA沉淀。

 

15. 洗涤:使用70%乙醇洗涤RNA沉淀,以去除杂质。加入适量的70%乙醇,轻轻混匀,然后离心5分钟。

 

16. 去除乙醇:小心地倒出乙醇,避免损失RNA沉淀。

 

17. 干燥:将离心管倒置在干燥台或96孔板上,使RNA沉淀自然干燥。

 

18. 溶解:在适当的缓冲液中溶解RNA沉淀,使其可以用于后续实验。

 

这是一般的RNA提取步骤,具体的实验方法可能会因实验目的和试剂盒的不同而有所差异。因此,在进行实验之前,最好参考所用试剂盒的说明书以及相关文献方法。

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