提取病毒rna时细胞如何制样
提取病毒RNA时,需要从感染病毒的细胞中提取RNA。下面是一般的制样步骤:
1. 细胞收集:收集感染病毒的细胞,如病毒感染的培养细胞或组织细胞。
2. 细胞裂解:使用适当的细胞裂解缓冲液(例如Trizol或RLT缓冲液)将细胞裂解,以释放细胞内的RNA。根据具体实验要求,可以采用不同的方法进行细胞裂解,如机械破碎、冻融、超声波或酶切等。
3. 混匀:轻轻混匀细胞裂解液,以确保将RNA均匀分散在溶液中。
4. 加入含酚/氯仿的溶液:加入等体积的酚/氯仿试剂,混合均匀。酚能够分离RNA,而氯仿则用于去除蛋白质。
5. 离心:使用高速离心(一般为12000-14000 × g)离心10-15分钟,使酚/氯仿溶液分离为上层的水相和下层的有机相。
6. 转移上层水相:小心地将上层水相转移到新的离心管中。这个上层水相富含RNA。
7. 沉淀RNA:加入等体积的异丙醇或乙醇,并轻轻混匀,使RNA沉淀。
8. 离心:将样品在室温或冰上以适当的速度离心10-15分钟,以沉淀RNA。
9. 去除上清液:小心地倒出上清液,避免损失RNA沉淀。
10. 洗涤:使用70%乙醇洗涤RNA沉淀,以去除杂质。加入适量的70%乙醇,轻轻混匀,然后离心5分钟。
11. 去除乙醇:小心地倒出乙醇,避免损失RNA沉淀。
12. 干燥:将离心管倒置在干燥台或96孔板上,使RNA沉淀自然干燥。
13. 溶解:在适当的缓冲液中溶解RNA沉淀,使其可以用于后续实验。
需要注意的是,病毒RNA提取可能需要特殊的步骤和试剂,具体的方法可能会因病毒类型和实验目的的不同而有所差异。因此,在进行实验之前,最好参考所用试剂盒的说明书以及相关文献方法。