trizol法提取全血rna

Trizol法是一种常用的RNA提取方法,适用于提取各种类型的组织和细胞中的RNA,包括全血。

 

以下是使用Trizol法提取全血RNA的一般步骤:

 

1. 收集全血样品:使用适当的采血工具采集全血样品。一般来说,采用EDTA抗凝管或血液采样管收集全血样品。

 

2. 细胞裂解:将全血样品加入等体积的Trizol试剂中(Trizol试剂含有酚和胚芽甲烷),充分混匀以使细胞完全裂解,Trizol试剂会溶解细胞膜和核酸蛋白结合,使RNA释放到溶液中。

 

3. 添加溶解剂:加入适量的氯仿,混匀均匀,这将形成两相体系,上层是含有RNA的水相,下层是含有DNA、蛋白质等的有机相。

 

4. 分离:离心管在高速离心下,将两相分离开。

 

5. 收集RNA:将上层水相取出并转移到新离心管中,加入等体积的异硫酸盐乙醇沉淀试剂(例如,异硫酸盐酚氯仿混合液),混匀均匀,使RNA沉淀。

 

6. 沉淀:将试剂混合液沉淀在冰箱中冷藏20-30分钟,使RNA沉淀成白色胶状物。

 

7. 洗涤和纯化:用75%乙醇溶解RNA沉淀,通过离心洗涤去除杂质,最后将RNA用RNase-free水溶解,并通过测量光密度来测定RNA的浓度和纯度。

 

请注意,对于使用Trizol法提取全血RNA,样品的处理过程需要在无RNase酶的环境中进行,以避免RNA的降解。此外,操作过程中应遵循相应的安全操作规范和实验室指南。最好参考制造商的使用说明和推荐的步骤,以确保最佳的RNA提取结果。

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