rna提取怎么不被降解

为了避免RNA在提取过程中被降解,以下是一些常用的方法和技巧:

 

1. 快速开始:尽可能快地开始RNA提取过程,以最大限度地减少RNA的降解。可以在采集样品后立即进行细胞裂解,并尽快进行后续的操作。

 

2. 保持低温:在整个提取过程中应尽量保持低温,降低RNA降解的风险。使用预冷的试剂和离心管,并将样品保存在低温环境中,如冰上或冷冻设备中。同时,避免过长时间的离心或处理,以减少RNA暴露在室温下的时间。

 

3. 使用RNase抑制剂:加入RNase抑制剂到提取试剂中,以抵制RNase的活性,保护RNA免受降解。常用的RNase抑制剂包括RNasin和RNaseOUT等。

 

4. 避免氧化:通过添加抗氧化剂来防止RNA的氧化降解。例如,可以向提取缓冲液中添加DTT(dithiothreitol)或β-mercaptoethanol。

 

5. 防止污染:确保使用RNase-free的试剂和耗材进行提取过程。这包括使用经过验证的RNase-free离心管、液体处理设备和经过RNase灭活处理的试剂。

 

6. 快速处理:在提取过程中,尽量减少操作的时间和暴露时间,以及将样品洗涤和沉淀过程尽快进行。

 

7. 避免强力剪切:在细胞裂解和混合的过程中,避免强力剪切(如剪切搅拌器)以减少RNA的降解。

 

8. 调整pH值:在提取过程中,确保缓冲液的pH适合RNA的稳定性。大多数情况下,RNA的稳定性在 pH 7-8之间较高。

 

总之,通过遵循上述方法和技巧,可以最大限度地减少RNA在提取过程中的降解,保护RNA的完整性和质量。

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