组织rna提取步骤
组织RNA提取是一种从细胞组织中提取RNA分子的方法。下面是一种常用的组织RNA提取方法:
1. 组织收集:收集待提取RNA的组织样品,可以通过离心收集细胞沉淀,或者直接收集整个组织样品。
2. 组织打破:将组织样品彻底打破以释放内部的RNA。常见的方法有机械破碎(如研钵研磨,液氮冲击等)、超声波破碎、细胞破碎酶等。
3. 细胞裂解:使用裂解缓冲液破坏细胞膜并释放RNA。常见的裂解缓冲液成分包括Trizol、SDS、聚山梨酸钠等。
4. 非酶裂解:加入酸性酚,将细胞溶解并提取RNA分子。酸性酚可以离去细胞核酸结合蛋白和DNA,保留RNA。
5. 沉淀:使用异丙醇或乙醇进行沉淀,将RNA分子沉淀出来。
6. 洗涤和纯化:用75%的乙醇洗涤RNA沉淀,去除杂质。然后使用RNA质量调节剂(例如EDTA)溶解RNA。
7. DNA去除:通过使用DNA酶或DNA去外切酶去除RNA样品中的DNA污染。
8. RNA质检:通过凝胶电泳、比色法或使用RNA分析仪器检测RNA的质量和浓度。
需要注意的是,不同组织的RNA提取方法可能存在一些差异,因为不同组织的细胞结构和特性可能会影响细胞裂解和RNA的提取效果。因此,在选择和优化组织RNA提取方法时,需要根据具体的样品特点进行调整。
综上所述,组织RNA提取是从细胞组织中提取RNA分子的关键步骤,为后续RNA分析提供可靠的基础。