植物总rna提取
植物总RNA提取是从植物样本中提取包括mRNA、rRNA和tRNA在内的全部RNA的常规实验操作。以下是一种常见的植物总RNA提取方法：
材料和试剂：
1. 植物样本：如叶片、茎、根等。
2. TRIzol试剂（或类似的RNA提取试剂）。
3. 液氮或干冰。
4. 离心管和离心机。
5. RNase-free试剂和工具。
实验步骤：
1. 准备样本：
- 收集新鲜的植物组织样本，并尽量快速地将其置于液氮或干冰中以保持RNA稳定。
- 如果样本不是立即处理，可以将其在液氮中冷冻并存储在-80°C冰箱中。
2. 组织粉碎：
- 将植物样本放入一个冰冻的研钵或离心管中。
- 使用液氮或干冰研磨样本，使其快速细粉化。
3. 加入 TRIzol：
- 将粉碎后的样本转移到一个离心管中。
- 按照 TRIzol试剂的说明，加入适量的 TRIzol，通常是样本重量的10倍。
4. 细胞裂解：
- 用离心管盖盖好离心管，反复颠倒混合样本和 TRIzol。确保样本充分悬浮在 TRIzol中。
- 将样本在室温下静置5分钟，使 TRIzol充分裂解细胞壁，并使 RNA完全溶解。
5. 添加有机溶剂：
- 加入等体积的氯仿到离心管中。
- 盖子盖好离心管并轻轻摇晃5分钟，使 TRIzol 分为两相。
6. 离心分层：
- 使用离心机以最大速度（12000-15000 x g）离心离心管15分钟。
- 离心后，会形成两个相：上层为澄清的上清液，中间为白色的亚相，下层为红色的有机相。
7. 收集上清液：
- 使用移液器将上清液（上层透明相）小心地转移至一个新的 RNase-free 离心管中。
8. 沉淀 RNA：
- 加入 等体积的异丙醇（isopropanol）到上清液中，并混合均匀。
- 在室温下静置10分钟，使 RNA 沉淀。
9. 离心和洗涤：
- 使用离心机以最大速度（12000-15000 x g）离心离心管10分钟。
- 倒出上清液，然后使用75%无水乙醇进行一次洗涤，倒出乙醇。
- 再次使用离心机以最大速度（12000-15000 x g）离心离心管5分钟，去除余留的乙醇。
10. 空气干燥和溶解：
- 在室温下放置 RNA 沉淀离心管中，使其自然空气干燥。
- 使用RNase-free水或缓冲液溶解RNA沉淀。根据进一步实验的需要，可以使用DEPC水或Tris-EDTA缓冲液溶解RNA。
需要注意的是，在整个植物总RNA提取的过程中，一定要严格遵循RNase-free操作，并尽量避免RNA的降解。每个实验室可能会有一些细微的差异，因此最好根据试剂盒厂商的建议和实验室的特定要求进行调整。
