血清rna提取

血清RNA提取是从血清样品中提取RNA的方法,血清是血液中经离心去除了红细胞和凝块后的清液。血清中含有丰富的细胞外RNA,如circulating miRNA和其他非编码RNA,这些RNA在疾病诊断和生物标记物研究中具有重要的潜在应用。

 

以下是一种常见的血清RNA提取方法:

材料和试剂:

1. TRIzol试剂 (Invitrogen) 或者 RNA 提取试剂盒

2. RNase-free乙醇

3. RNase除去剂

4. DEPC 处理的水

5. RNase-free管子和离心管

 

实验步骤:

1. 在室温下将血清样品从冷冻保存温度解冻至室温。

2. 将血清样品旋转(1,000 x g, 10分钟)或离心(8,000 x g, 10分钟)以除去细胞残渣和凝块。将上清液轻轻转移到一个RNase-free 离心管中。

3. 加入适量的 TRIzol试剂 或 RNA 提取试剂盒,根据试剂的说明书推荐的比例加入。

4. 彻底混合样品,在室温下孵育5分钟。

5. 加入适量的RNase-free乙醇,通常是样品体积的1.5-2倍,使其终浓度达到70%。

6. 将混合物转移到一个RNase-free管中,轻柔混合,保持在室温下搅拌2分钟,以确保完全沉淀RNA。

7. 离心样品(12,000-16,000 x g,4℃)15分钟,以使RNA沉淀。

8. 仔细将上清液转移至新的RNase-free离心管中,避免移动沉淀。

9. 加入适量的RNase-free洗涤缓冲液(根据试剂盒说明),轻轻搅拌。

10. 离心管子(12,000-16,000 x g,4℃)10分钟,底部乙醇将被除去。

11. 将底物称重转移到一个干燥的RNase-free管中。

12. 加入适量的DEPC处理的水或RNase-free水(根据试剂盒说明),然后将其悬浮。

13. 使用吸光光度计或其他方法测量RNA的浓度和纯度。

 

注意事项:

1. 在操作过程中使用RNase-free的试剂和工具,以防止RNA降解。

 

2. 所有设备和材料应该是DEPC处理过的,以去除RNase。

 

3. 保持试剂和样品的低温,以防止RNA降解。

 

4. 注意血清样品可能含有富含蛋白质的沉淀物,需要小心操作以避免污染。

 

以上是一种常见的血清RNA提取方法。根据实验的需求和试剂盒的说明,可以进行一些调整。

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