血清rna提取
血清RNA提取是从血清样品中提取RNA的方法,血清是血液中经离心去除了红细胞和凝块后的清液。血清中含有丰富的细胞外RNA,如circulating miRNA和其他非编码RNA,这些RNA在疾病诊断和生物标记物研究中具有重要的潜在应用。
以下是一种常见的血清RNA提取方法:
材料和试剂:
1. TRIzol试剂 (Invitrogen) 或者 RNA 提取试剂盒
2. RNase-free乙醇
3. RNase除去剂
4. DEPC 处理的水
5. RNase-free管子和离心管
实验步骤:
1. 在室温下将血清样品从冷冻保存温度解冻至室温。
2. 将血清样品旋转(1,000 x g, 10分钟)或离心(8,000 x g, 10分钟)以除去细胞残渣和凝块。将上清液轻轻转移到一个RNase-free 离心管中。
3. 加入适量的 TRIzol试剂 或 RNA 提取试剂盒,根据试剂的说明书推荐的比例加入。
4. 彻底混合样品,在室温下孵育5分钟。
5. 加入适量的RNase-free乙醇,通常是样品体积的1.5-2倍,使其终浓度达到70%。
6. 将混合物转移到一个RNase-free管中,轻柔混合,保持在室温下搅拌2分钟,以确保完全沉淀RNA。
7. 离心样品(12,000-16,000 x g,4℃)15分钟,以使RNA沉淀。
8. 仔细将上清液转移至新的RNase-free离心管中,避免移动沉淀。
9. 加入适量的RNase-free洗涤缓冲液(根据试剂盒说明),轻轻搅拌。
10. 离心管子(12,000-16,000 x g,4℃)10分钟,底部乙醇将被除去。
11. 将底物称重转移到一个干燥的RNase-free管中。
12. 加入适量的DEPC处理的水或RNase-free水(根据试剂盒说明),然后将其悬浮。
13. 使用吸光光度计或其他方法测量RNA的浓度和纯度。
注意事项:
1. 在操作过程中使用RNase-free的试剂和工具,以防止RNA降解。
2. 所有设备和材料应该是DEPC处理过的,以去除RNase。
3. 保持试剂和样品的低温,以防止RNA降解。
4. 注意血清样品可能含有富含蛋白质的沉淀物,需要小心操作以避免污染。
以上是一种常见的血清RNA提取方法。根据实验的需求和试剂盒的说明,可以进行一些调整。