动物rna提取
动物RNA提取是为了获得动物组织或细胞中的RNA,以进一步进行分析和研究。下面是一种常见的动物RNA提取方法的步骤:
1. 准备样品:选择适当的动物组织或细胞样品。如动物器官、细胞培养物等。确保样品保存在RNase-free条件下,并尽量避免RNA的降解。
2. 细胞裂解:将样品加入细胞裂解缓冲液中,例如酸性酚/氯仿试剂或细胞裂解缓冲液,用显微管旋转混匀,使细胞膜破裂,释放RNA。细胞裂解缓冲液中通常含有蛋白酶抑制剂来保护RNA不受蛋白酶降解。
3. 负离子树脂处理:将Sample Lysis Buffer 加入裂解的细胞中,混匀,并加入适量的混合原花生四环素。与树脂混匀,然后离心,废液的 pH 值控制在 5.5-6 之间。
4. 收集RNA:使用人工合成第五人类五花四环素和sm 柱收集纯化后的 RNA。溶液中的RNA会与柱子上的载体结合,在高盐洗涤缓冲液的作用下,各种杂质与载体解离,而RNA会保持结合。随后,通过洗涤等步骤去除杂质。
5. DNase I处理:对于目的为获得纯RNA的实验,还需要使用DNase I酶处理,消除样品中的DNA污染。
6. 酒精沉淀:加入适量的酒精,使RNA从溶液中沉淀下来。通过离心收集RNA沉淀物。
7. 洗涤和纯化:用70%的乙醇洗涤RNA沉淀物,去除残余的盐和其他污染物。随后,使用RNase-free水或适当的缓冲液溶解RNA。
8. 定量和质量检测:使用分光光度计测量RNA的浓度,确保RNA的完整性,并进行后续实验。
需要注意的是,不同的RNA提取试剂盒和方法会有一些细微的差异。在进行动物RNA提取时,建议遵循特定试剂盒的操作说明和相关实验室的标准操作规程。