ctab法提取植物dna

CTAB(Cetyltrimethylammonium bromide)法是一种常用的植物DNA提取方法,适用于维管束植物、真菌和苔藓等含有高浓度多酚类物质的样品。以下是使用CTAB法提取植物DNA的一般步骤:

 

1. 样品准备:收集植物组织样品,最好是新鲜的叶片、茎或根部。将样品切碎成小片或粉末状态,放入离心管中。

 

2. 组织破碎:加入适量的研磨缓冲液(如CTAB缓冲液)浸泡组织,使用研钵或涡旋混合器将组织研磨成细胞裂解物。研磨缓冲液的配方可以根据实验需求进行调整,一般包含CTAB、EDTA、混合水和DTT(二硫苏糖醇)等。

 

3. 细胞裂解:将细胞裂解物转移到一个离心管中,加入等体积的氯仿混合液(氯仿/异戊醇)并充分混合。这一步的目的是去除脂质和蛋白质。

 

4. 沉淀DNA:沉淀离心管,离心10~15分钟,以获得两个相分离的相。上层为DNA含有的水相,下层为有机相。小心地转移上层水相到一个新的离心管中。

 

5. 沉淀DNA:加入适量的冰冷乙醇,使DNA沉淀下来。将离心管放置在冰箱中静置10~15分钟。

 

6. 捞取DNA:用一根无菌的玻璃棒或吸管轻轻地将DNA沉淀捞起,并转移到预冷的70%乙醇中洗涤。

 

7. 乙醇洗涤:离心管中加入70%乙醇,轻轻倒至表面。离心1~2分钟,倒掉上层液体。重复此步骤1~2次。

 

8. 干燥和溶解:将离心管倒置,静置10~15分钟以将乙醇蒸发。最后用TE缓冲液(10 mM Tris-HCl,1 mM EDTA,pH 8.0)等溶解DNA。

 

9. 质量检测:使用分光光度计测量DNA溶液的吸光度,根据A260/A280比值来评估DNA的纯度。此外,也可以进行凝胶电泳等方法对DNA进行分析。

 

以上是使用CTAB法提取植物DNA的一般步骤,具体操作时可以根据实验需求和样品特点进行一些调整。重要的是保持无菌操作、避免污染,并严格按照实验步骤进行操作。

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