土壤总dna提取

以下是一种常用的土壤总DNA提取方法(CTAB法):

 

1. 样品准备:取一定量的土壤样品,尽量避免植物根系和大块杂质,将其放入无菌研钵中。

 

2. 细胞裂解:添加适量的提取缓冲液(例如含有CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)和DTT(二硫苏糖醇)的缓冲液),与土壤样品充分混合,溶液应覆盖土壤样品。

 

3. 细胞裂解:将混合溶液转移至无菌离心管中,并在65摄氏度条件下进行孵育。孵育时间可根据需要确定,一般为1-2小时。在孵育过程中,可以轻轻摇动或颠倒离心管,促进细胞的裂解。

 

4. 蛋白质沉淀:将孵育后的提取溶液离心5-10分钟,以去除无机盐和细胞残渣。上清液中的DNA溶液可转移到新的离心管中。

 

5. 加入异丙醇:加入等体积的冷异丙醇,混匀后用离心机离心15分钟,以沉淀DNA。倒掉上清液。

 

6. 洗涤:使用70%乙醇洗涤脱盐,避免液位在DNA沉淀上,以防止DNA沉淀的损失。离心5分钟,去除上清液。

 

7. 干燥:使用流速适度的干燥管或在室温下将离心管开盖,让DNA气干。避免过度干燥。

 

8. 重溶:根据实验需求,选择适当的溶剂(如TE缓冲液)进行DNA重溶。

 

以上步骤提供了一种常用的土壤总DNA提取方法(CTAB法)。然而,土壤中的样品复杂性可能导致提取过程中的差异,因此,根据具体的实验目的和所需的试剂,可能需要根据实验室的经验或参考相关文献对方法进行调整和优化。

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