全血dna提取
以下是一种常见的全血DNA提取方法,供参考:
1. 准备实验材料和试剂:准备离心管、缓冲液(包括Tris-HCl缓冲液、EDTA液等)、蛋白酶K溶液、蛋白酶K缓冲液、异丙醇、洗涤缓冲液(如乙醇),以及一些常用的实验器具如离心机、烧杯、显微镜等。
2. 收集全血样本:用采血针或其他适当的工具从受试者的静脉或指尖采集2-5 mL全血样本。要确保采集样本时的无菌条件和操作规范。
3. 快速混合全血样本:采集到的全血样本应当尽快混合,以确保细胞和DNA在样品中均匀分布。
4. 血细胞溶解:将混合后的全血样本转移到离心管中,并加入相应体积的Tris-HCl缓冲液,轻轻颠倒离心管,使其充分混合。缓冲液的体积通常为全血样本体积的两倍。
5. 加入蛋白酶K:在缓冲液中加入适量的蛋白酶K溶液,按照试剂盒或实验室标准操作程序的要求进行。蛋白酶K的最佳浓度可以根据所用试剂盒或研究文献进行调整。
6. 温育和反应:将含有全血样本和蛋白酶K的离心管,放入恒温水浴或热拌器中,在适当的温度下(一般为56-60摄氏度)进行一段时间的反应,以溶解血细胞。
7. 添加酚/氯仿:将等体积的酚/氯仿加入反应管中,轻轻颠倒数次,使其充分混合。
8. 离心分离:将混合液离心,在充分离心的情况下,液体会分为4个相分层:上层为水醇相,中间为DNA相,下层为蛋白质和细胞碎片相,最底层为红细胞相。
9. 收集DNA相:使用微量吸管或其他合适工具,将中间的DNA相转移至新的离心管中。
10. 洗涤和纯化DNA:加入洗涤缓冲液,轻轻颠倒离心管,使其充分混合。然后进行一系列的洗涤步骤,以去除杂质和残余的蛋白质。洗涤可以使用乙醇或其他洗涤缓冲液进行。
11. 重悬DNA:最后,用去离子水、Tris-HCl缓冲液或其他合适的溶液重悬DNA,以便进行后续实验分析。
以上是一种常见的全血DNA提取方法,具体步骤可能会因试剂盒的不同而有所区别。建议在进行实验之前,仔细阅读所使用的试剂盒的说明书,并按照其提供的具体步骤进行操作。